科研整体解决方案

01
CyTOF
单细胞质谱流式
(Mass Cytometry, CyTOF)
质谱流式细胞技术(Mass Cytometry, CyTOF)结合了飞行时间质谱和流式细胞技术的优势,采 用带有金属同位素标签的抗体对细胞进行标记 (细胞表面和内部的蛋白分子),通过飞行时间质 谱分析各细胞上的标签组成,进行细胞表型和功能精细深入的研究。目前,能够实现单细胞水平 超过40个marker的同步检测,由于CyTOF利用同位素重金属偶联的抗体标记细胞,而不是荧光 染料,因此从本质上突破了传统荧光流式通道数量局限。

技术原理



利用同位素重金属偶联抗体,采用金属同位素标记的抗体来标记细胞表面和内部的蛋白分子,标记好的细胞通过喷雾器(Nebulizer)被分离成单个细胞,之后进入等离子炬(ICP)进行离子化, 单细胞形成的 离子云进入到飞行时间质谱仪中, 从而检测出每个细胞所携带的金属标签的种类和含量, 最终获得单细胞的质谱数据。
由于不同金属离子质荷比不同,在检测器(quadrupole)中飞行时间不同(Time-of-Flight)。离子越重,所需的时间越长。

技术优势

  • 金属标签种类多
    超过50多种金属标签
    >44个抗体标签
  • 可靠生物安全性, 无放射性
  • 稳定性好
    不受光漂白影响
    可对固定和打孔条件的耐受胞内蛋白的检测
  • 通道多
    135个通道, 同时检测几十个靶标
  • 无串色
    无需单染管,无需调补偿
  • 强度变化小, 配色简单
  • 背景低,信号更准确

应用领域

  • 细胞亚群的变化,寻找与疾病发生、发展、复发相关的生物标志物(早期诊断、伴随诊断、复发预测、疾病分型等)
  • 特定人群、特定部位的免疫特征分析(如孕妇、胎儿、肠道等)
  • 新药药靶的发现与验证(先导化合物、激酶抑制剂、单抗药物等)
  • 单细胞测序数据的验证与深入细胞分型

相关文献

  • [1]Arnett LP, Rana R, Chung WW, Li X, Abtahi M, Majonis D, Bassan J, Nitz M, Winnik MA. Reagents for Mass Cytometry. Chem Rev. 2023 Feb 8;123(3):1166-1205. doi: 10.1021/acs.chemrev.2c00350. Epub 2023 Jan 25. PMID: 36696538.阅读全文
  • [2]Qazi MA, Vora P, Venugopal C, Sidhu SS, Moffat J, Swanton C, Singh SK. Intratumoral heterogeneity: pathways to treatment resistance and relapse in human glioblastoma. Ann Oncol. 2017 Jul 1;28(7):1448-1456. doi: 10.1093/annonc/mdx169. PMID: 28407030.阅读全文
  • [3]Hartmann FJ, Bendall SC. Immune monitoring using mass cytometry and related high-dimensional imaging approaches. Nat Rev Rheumatol. 2020 Feb;16(2):87-99. doi: 10.1038/s41584-019-0338-z. Epub 2019 Dec 31. PMID: 31892734; PMCID: PMC7232872.阅读全文
  • [4]Artyomov MN, Van den Bossche J. Immunometabolism in the Single-Cell Era. Cell Metab. 2020 Nov 3;32(5):710-725. doi: 10.1016/j.cmet.2020.09.013. Epub 2020 Oct 6. PMID: 33027638; PMCID: PMC7660984.阅读全文
02
Full Spectrum Flow
全光谱流式
全光谱流式是一种基于流式细胞术并结合光学技术发展而来的一种快速、灵敏的高分辨率细胞 分析技术,可以实现对单个细胞的多参数同时检测,对细胞表面和/或细胞内抗原的定量及表型 分析。当单个细胞流过全光谱流式细胞分析仪中的单个或多个激光器后,通过检测器可以检测 到每个细胞的散射光信息和多个荧光信号,可以同时对单个样本中的数百万个细胞进行快速精 准检测并分析表征。目前,可以轻松实现40色以上的免疫分型检测实验。

技术原理


在全光谱流式细胞术中,采用多个检测通道来检测获得每个激光下荧光染料的全部发射光谱信息,这样,每个荧光染料的完整荧光光谱都可以被识别、记录其光谱特征,每个荧光染料的完整光谱都是有其特 征之处。每个细胞的完整光谱信号是由多个染料信号叠加而成。通过数学算法进行光谱解混,根据荧光染料的独特光谱特征,将处于叠加状态的全光谱拆分成每个染料各自的信号值,就可以通过双参数图像 进行常规分析了。

技术优势

  • 全光谱信息捕获和拆分,无需补偿,客观可靠
    传统流式基于滤光片,仅能收集狭窄波长范围内荧光信号,信号损失和荧光渗漏
    光谱流式基于检测器阵列采集全波长信号,信号更全面,结果更精准
    根据每个染料的参照光谱和客观的解混公式,仪器可以自行对数据进行解析
  • 无需每次做单染管, 大为简化的实验流程
    多色实验无需每次重复做单染管,简化了实验流程,节省临床样本、时间和试剂
  • 区分高度重叠的荧光光谱,流式实验配色更加灵活易用
    光谱邻近染料自由搭配使用,仪器可以区分两个荧光染料光谱的差异性
  • 区分细胞自发荧光,消除假阳性干扰
    鉴定识别多种细胞自发荧光信号,有利于还原数据精确度
  • 标准化检测和审计追踪功能
    不同仪器间信号强度完全一致,不同仪器上的信号强度随时间延续仍完全一致(60day)
    同一仪器同一样本,随时间延续,各Marker信号强度和细胞亚群比例严格一致
    适合多中心、长周期项目研究
    不同样本间具有可比性

应用领域

  • 全光谱流式的常见应用包括免疫学、传染病、肿瘤免疫学、微生物学、生物标志物鉴 定和药物发现以及分子生物学。人们越来越想要了解探索复杂的免疫系统,并且利 用免疫细胞来提高健康状况,这都使高维细胞检测越来越普及。
  • 细胞亚群的变化,寻找与疾病发生、发展、复发相关的生物标志物(早期诊断、伴随诊断、复发预测、疾病分型等)
  • 特定疾病人群、外周循环系统的免疫特征分析
  • 新药药靶的发现与验证(先导化合物、激酶抑制剂、单抗药物等)
  • 单细胞测序数据的验证与深入细胞分型

相关文献

  • [1]Dyring-Andersen B, Løvendorf MB, Coscia F, Santos A, Møller LBP, Colaço AR, Niu L, Bzorek M, Doll S, Andersen JL, Clark RA, Skov L, Teunissen MBM, Mann M. Spatially and cell-type resolved quantitative proteomic atlas of healthy human skin. Nat Commun. 2020 Nov 5;11(1):5587. doi: 10.1038/s41467-020-19383-8. PMID: 33154365; PMCID: PMC7645789.阅读全文
  • [2]Wroblewska A, Dhainaut M, Ben-Zvi B, Rose SA, Park ES, Amir ED, Bektesevic A, Baccarini A, Merad M, Rahman AH, Brown BD. Protein Barcodes Enable High-Dimensional Single-Cell CRISPR Screens. Cell. 2018 Nov 1;175(4):1141-1155.e16. doi: 10.1016/j.cell.2018.09.022. Epub 2018 Oct 18. PMID: 30343902; PMCID: PMC6319269.阅读全文
  • [3]Wang Y, Hammes F, De Roy K, Verstraete W, Boon N. Past, present and future applications of flow cytometry in aquatic microbiology. Trends Biotechnol. 2010 Aug;28(8):416-24. doi: 10.1016/j.tibtech.2010.04.006. Epub 2010 Jun 10. PMID: 20541271.阅读全文
  • [4]Veerman RE, Teeuwen L, Czarnewski P, Güclüler Akpinar G, Sandberg A, Cao X, Pernemalm M, Orre LM, Gabrielsson S, Eldh M. Molecular evaluation of five different isolation methods for extracellular vesicles reveals different clinical applicability and subcellular origin. J Extracell Vesicles. 2021 Jul;10(9):e12128. doi: 10.1002/jev2.12128. Epub 2021 Jul 22. PMID: 34322205; PMCID: PMC8298890.阅读全文